厭氧培養箱的氧氣置換是一個(gè)關(guān)鍵步驟,以確保培養箱內部形成無(wú)氧或低氧環(huán)境,從而滿(mǎn)足厭氧微生物的生長(cháng)需求。以下是一個(gè)詳細的置換氧氣步驟:
一、準備階段
放置附件和器具:按使用要求放置好必要的附件和器具。
開(kāi)啟電源和照明:通電源開(kāi)照明燈,開(kāi)啟溫控儀,調節至所需溫度。
放入干燥劑和指示紙:在操作室內放入干燥劑和美蘭指示紙(封閉狀態(tài)),用于檢測氧氣含量和濕度。
二、氮氣置換階段
密封手套:將乳膠手套套在觀(guān)察板法蘭圈上并扎緊,以防止氣體泄漏。
氮氣進(jìn)氣:接通氮氣進(jìn)氣路,打開(kāi)氮氣控制閥,使手套鼓起,然后關(guān)閉閥門(mén),并再次扎緊袋口。
重復置換:重復上述充氮過(guò)程,至少進(jìn)行兩次氮氣置換。每次置換前,應確保取樣室先抽真空,并用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。
三、混合氣體置換階段
調整混合氣體:混合氣體通常包含氮氣(N2)、氫氣(H2)和二氧化碳(CO2),按一定比例(如N2 85%、H2 10%、CO2 5%)混合。
混合氣體進(jìn)氣:調換氣路,打開(kāi)混合氣閥進(jìn)氣。充氣時(shí),取樣室應先抽真空,并隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。
調整流量計:關(guān)掉混合氣體閥后,打開(kāi)另一閥門(mén),使混合氣體經(jīng)過(guò)流量計。調整流量計,使流量控制在每分鐘10ml左右。
重復置換:重復上述混合氣體置換過(guò)程2~3次,以確保操作室內形成穩定的厭氧環(huán)境。
四、后續處理
催化除氧:打開(kāi)操作室內的除氧催化器電源,進(jìn)行催化除氧。一小時(shí)后,打開(kāi)美蘭指示紙觀(guān)察其顏色變化,如不變色則表明操作室內已達到厭氧環(huán)境。
滅菌處理:開(kāi)啟紫外線(xiàn)燈,對操作室內進(jìn)行滅菌處理。滅菌時(shí)間可根據具體實(shí)驗要求自定。
五、注意事項
氣體壓力控制:在置換過(guò)程中,應嚴格控制氣體的輸入壓力,以防爆管或損壞設備。
定期檢查:連續使用厭氧培養箱時(shí),應定期檢查和補充除氧劑和干燥劑,確保室內厭氧條件的維持。
安全操作:在操作過(guò)程中,應嚴格遵守安全操作規程,防止氣體泄漏或設備損壞。
通過(guò)以上步驟,可以有效地將厭氧培養箱內的氧氣置換出去,為厭氧微生物的生長(cháng)提供一個(gè)適宜的無(wú)氧或低氧環(huán)境。
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